CROMATOGRAFÍA DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS

                       OBJETIVOS
Separar y observar los distintos pigmentos que intervienen en el proceso fotosintético

                        MATERIAL
- Mortero
- Embudo
- Papel de filtro Vaso de precipitados Placa petri
- Productos Químicos: Alcohol de 96°
- Material de estudio: Hojas de verdes

                         FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA
Los cloroplastos deben su color verde al pigmento clorofila. Sin embargo lo que realmente existe en
los cloroplastos es una mezcla de pigmentos: Clorofila a, clorofila b, carotenos y xantofilas.
Todas esas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad, 10 cual permite su separación
ascendiendo por capilaridad por una tira de papel de filtro. Las más solubles se desplazaran a mayor
velocidad, pues acompañaran fácilmente al disolvente a medida que este va ascendiendo, mientras
que las menos solubles se desplazaran mas lentamente. De esta forma, al cabo de un tiempo, a 10
largo del papel poroso se irán situando los distintos pigmento s, y las bandas coloreadas serán tanto
más anchas cuanto mayor sea la abundancia de ellas en la mezcla.


                         REALIZACIÓN
1. Cogemos hojas verdes y las partimos finamente
2. Echamos las hojas en un mortero y las machacamos
3. Añadimos alcohol etílico al mortero y seguimos machacando hasta que el alcohol toma color
verde oscuro
4. Filtramos con el embudo para conseguir una solución de color verde intenso llamada "clorofila
bruta"

5. Echamos una pequeña cantidad de disolución de pigmentos en una placa Petri
6. Colocar un trozo de papel de filtro doblado en ángulo recto, de forma que se sujete vertical

7. Dejar reposar durante 15 minutos hasta que se separen las bandas

                        RESULTADOS Y CUESTIONES
1. ¿Qué bandas han aparecido?
2. ¿A que pigmento s corresponderán estas bandas, si tenemos en cuenta que la velocidad de
difusión de cada uno es, de mayor a menos: caroteno, xantofila, clorofila a y clorofila b? 3. ¿Qué
pigmento s son más abundantes?
4. ¿Que es lo que les pasa a las hojas en otoño?
5. ¿Porqué empleamos alcohol para extraer la clorofila?

PROTOCOLO PARA EXTRAER ADN DE UN TOMATE

1. La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan  los lípidos de las membranas celulares y las rompen. 
2. La sal evita la unión de las proteínas al ADN. 
3.  Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

                                      MATERIALES

1. Tomate
2. Agua destilada
3. Sal
4. Detergente de lavavajillas
5. Alcohol de 96º muy frío
6. Varilla de vidrio
7. Tubo de ensayo
8. Batidora
9. Vaso de precipitado
10. Pipeta

                                  PROCEDIMIENTO

1.  En el vaso de precipitado pequeño echa 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.
2. Añade una cucharada de sal.
3. Añade  25  mililitros de agua destilada.  
4. Mantener en un baño de hielo esta disolución.
5. Corta la zona central del vegetal elegido en cuadrados.
6. Tritura los trozos del vegetal (en el vaso de precipitado grande) con un poco de agua en la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células. 
7. Mezcla en el recipiente grande el triturado celular con la disolución inicial del vaso.
8. Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma
9. Haz pasar el líquido obtenido por un colador.
10. Retira 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y añade con la pipeta 5 mililitros de alcohol enfriado a 0º C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del tubo de ensayo, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la mezcla. 
11. Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2 capas. (Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los recipientesempleados  anteriormente).   
12. Introduce una varilla  justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre las 2 capas). Remueve la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. 
13. Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la capa de alcohol, con lo cual el ADN quedará adherido a su extremo, con el aspecto de un copo de algodón mojado. 
14. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.

                                 RESULTADOS

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro, ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción “profesional” se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN y que impiden que se unan al ADN.